穩(wěn)定細胞系是指將外源基因整合到宿主細胞基因組中，使外源基因能夠在宿主細胞中長期穩(wěn)定表達，這樣的細胞系稱為穩(wěn)定細胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上，通過轉(zhuǎn)染宿主細胞，外源基因整合到宿主染色體上，用載體中所含抗性基因進行篩選即可得到成功整合目的基因的細胞。
在試驗過程中，常用的真核表達載體抗性篩選標志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)等。通過篩選可得到符合實驗要求的穩(wěn)定高表達目的蛋白細胞株或者穩(wěn)定沉默目的基因的細胞株。
其建立的原理是，將我們所要的目的基因真核到宿主細胞上，隨著細胞的生長繁殖，目的基因可以穩(wěn)定的表達，在通過抗生素的不斷加壓篩選，得到構(gòu)建穩(wěn)定細胞系的過程。相對于瞬時轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)持續(xù)周期長，細胞整合穩(wěn)定，能夠滿足后期對蛋白的大量需求。
以下情況需要使用穩(wěn)定細胞系：
1、實驗周期長，要求外源DNA在分裂細胞中長期表達，>2周。
2、需要構(gòu)建誘導(dǎo)表達系統(tǒng)。當(dāng)目的基因的過表達或者干擾需要時空特異性，或者會引起細胞毒性等不利影響。
3、基因敲除/插入等修飾宿主細胞基因組的實驗。
4、篩選拷貝數(shù)適宜的細胞。
5、對于某些很難轉(zhuǎn)染的細胞種類。即使病毒載體也無法實現(xiàn)高效率轉(zhuǎn)導(dǎo)。
6、通過構(gòu)建穩(wěn)定細胞株實現(xiàn)更好的基因干擾效果。
7、后續(xù)實驗中需要將轉(zhuǎn)染細胞注射進入動物體內(nèi)。
8、需要構(gòu)建單克隆細胞株可以去除個體差異。
好了就到這里吧，上海通蔚實業(yè)有限公司為您分享哪些情況需要使用穩(wěn)定細胞系，希望可以幫助到大家。我司成立的初衷就定位于以人為本，以主打產(chǎn)品品質(zhì)取勝的理念，為我們國家生命科學(xué)研究做一些力所能及的工作，做一家值得尊重并受人信賴的企業(yè)！產(chǎn)品免費運輸，如出現(xiàn)運輸質(zhì)量問題，我們可以包退換貨，具有完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號3463室
主營產(chǎn)品：ELISA檢測試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免疫試劑盒，人ELISA試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號：滬ICP備14033764號-3 總訪問量：1086086 站點地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線 管理登陸
