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96T人血小板衍化生長(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2013-06-20   點(diǎn)擊次數(shù):1804次

 人血小板衍化生長(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒

            本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿

試驗(yàn)原理:
PDGF-BB試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知PDGF-BB濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將PDGF-BB和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PDGF-BB的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

 人血小板衍化生長(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。

操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 人血小板衍化生長(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒
局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線(xiàn)性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)無(wú)法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的PDGF-BB標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線(xiàn),樣品的PDGF-BB含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍:0-400ng/ml

4、敏感度: 1.0 ng/ml

 人血小板衍化生長(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒

DA2570-0.1mlcludin-5 緊密連接蛋白-5抗體0.1ml
DA2570-0.2mlcludin-5 緊密連接蛋白-5抗體0.2ml
DA2571-0.2mlOCT1 (organic cat-ion transporter1) 陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)器1抗體0.2ml
DA2572-0.2mlOCT2 (Octamer-binding transcription factor 2) 陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體0.2ml
DA2573-0.1mlOct-4(Octamer-4) 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體0.1ml
DAY1087-0.1mlGoat anti-human IgG/Cy5.5 熒光素Cy5.5標(biāo)記羊抗人IgG0.1ml
DAY1088-0.1mlBSA/Cy3 熒光素Cy5.5標(biāo)記牛血清白蛋白0.1ml
DAY1089-0.1mlRabbit IgG/Cy5.5 熒光素Cy5.5標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照)0.1ml
DAY1090-0.1mlMouse IgG/Cy5.5 熒光素Cy5.5標(biāo)記小鼠IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照)0.1ml
DA2573-0.2mlOct-4(Octamer-4) 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體0.2ml
DA2575-0.1mlODC(Ornithine decarboxylase) 抗鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗體0.1ml
DA2575-0.2mlODC(Ornithine decarboxylase) 抗鳥(niǎo)氨酸脫羧酶抗體0.2ml
DA2576-0.1mlOmgp (olyigodendrocyte myelin glycoprotein) 少突細(xì)胞髓磷脂糖蛋白抗體0.1ml
DA2576-0.2mlOmgp (olyigodendrocyte myelin glycoprotein) 少突細(xì)胞髓磷脂糖蛋白抗體0.2ml
DA2577-0.2mlompF(putative outer membrane porin F protein) 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗體0.2ml
DA2578-0.2mlOPCML (opioid binding protein/cell adhesion molecule-like) 阿片樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白抗體0.2ml
 

上海通蔚生物科技有限公司

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