影響反響要素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的共同，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)驗(yàn)均須用一系列不同濃度的參考規(guī)范品在相同的條件下制造規(guī)范曲線(xiàn)。以下就是上海通蔚生物的詳解：
測(cè) 定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒，規(guī)范曲線(xiàn)的范圍一般較寬，曲線(xiàn)點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸 光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線(xiàn)一般呈S形，其頭、尾部曲線(xiàn)趨于平整，中央較呈直線(xiàn)的部分是理想的檢測(cè)區(qū)域。在實(shí)驗(yàn)條件(包含試劑)較難 保證恒定的情況下，這種判別法較為合適。
在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后，核算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的，這里的P不代表陽(yáng) 性ELISA試劑盒(positive)，而是患者(patient)的縮寫(xiě)，不應(yīng)誤解。為避免混雜，更宜用S/N表明。在前期的間接法ELISA中，有 些作者定出S/N為陽(yáng)性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿襲。實(shí)際上每一測(cè)定體系應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是，N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢 物質(zhì)的人血清。
有的ELISA試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底 低得多。定性測(cè)定的結(jié)果判別是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗 出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表明。"陽(yáng)性"表明該標(biāo)本在該測(cè)定體系中有反響。"陰性"則為無(wú)反響。用定性判別法也可得到半定量 結(jié)果，即用滴度來(lái)表明反響的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性實(shí)驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，呈陽(yáng)性反響的稀釋度即為滴度。依據(jù)滴 度的凹凸，能夠判別標(biāo)本反響性的強(qiáng)弱，這比觀(guān)察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判別為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。 在間接法和夾心法ELISA試劑盒中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA試劑盒中則相反，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。兩類(lèi)反響的結(jié)果判別方法不同，分 述于下。
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